Блог

Jul 27, 2023

Разработка инновационной методики определения 6

Scientific Reports, том 13, номер статьи: 14172 (2023) Цитировать эту статью 3 Подробности Altmetric Metrics 6-Тиогуанин — иммунодепрессивный препарат, аналог гуанина, применяемый для лечения острых

Том 13 научных докладов, Номер статьи: 14172 (2023) Цитировать эту статью

3 Альтметрика

Подробности о метриках

6-Тиогуанин — иммунодепрессивный препарат, аналог гуанина, применяемый для лечения острых лейкозов и воспалительных заболеваний кишечника. Чрезмерное использование 6-тиогуанина во время клинического лечения может вызвать побочные эффекты. Более того, введение слишком низкой дозы будет неэффективным. Таким образом, существует острая необходимость в быстром, селективном и рутинном подходе к количественному определению 6-тиогуанина в жидкостях организма для поддержки клинического применения. Был разработан полностью валидированный метод ВЭЖХ для определения 6-тиогуанина в образцах цельной крови с использованием 5-бромурацила в качестве внутреннего стандарта. Нуклеотиды 6-тиогуанина высвобождались из эритроцитов под действием хлорной кислоты, а затем гидролизовались при 100 °C до исходного тиопурина, 6-тиогуанина. Были определены следующие параметры валидации метода: специфичность/селективность, диапазон линейности (479–17 118 нг/мл, R > 0,992), пределы обнаружения (150 нг/мл) и количественного определения (479 нг/мл), точность (- 5,6 <смещение < 14,7), повторяемость (CV 1,30–3,24%), промежуточная точность (CV 4,19–5,78%), степень извлечения (79,1–103,6%) и перенос. Кроме того, была исследована стабильность препарата в образцах цельной крови при различных условиях хранения. Предложенный метод пригоден для определения 6-тиогуанина в образцах эритроцитов цельной крови для контроля уровня лекарственного средства и, следовательно, правильного дозирования.

6-тиогуанин (6-ТГ) — пуриновый аналог гуанина; точнее, это серное производное гуанина1. 6-ТГ принадлежал к семейству тиопуринов и был введен в 1950 году для лечения лейкемии. Пятьдесят лет спустя врачи начали использовать его для лечения воспалительных заболеваний кишечника у тех, кто не получал азатиоприн (AZA) или меркаптопурин (MP) из-за побочных эффектов, ограничивающих дозировку, или субоптимального ответа2, 3. Однако возникли опасения по поводу профиля гепатотоксичности. затруднено из-за широкого использования, особенно узловой регенеративной гиперплазии (NRH)4. 6-ТГ также используется при клиническом лечении синдрома приобретенного иммунодефицита, аутоиммунных заболеваний, таких как псориаз, и химиотерапии острых лейкозов, особенно острого миелоидного лейкоза и острого лимфобластного лейкоза5, 6. Дополнительным риском, связанным с 6-ТГ, может быть развитие лимфома и рак кожи, как показано в случае терапии AZA/MP и анти-TNF7, 8. Поэтому важно регулярно проверять уровень 6-ТГ, чтобы подтвердить правильную дозу препарата или, в случае аномального результатов, корректировать дозу. Тиопурины, в том числе 6-ТГ, оказывают иммуносупрессивное действие за счет включения в нуклеиновые кислоты своих фармакологически активных метаболитов — 6-тиогуаниновых нуклеотидов (6-ТГН)9. Следовательно, это приводит к ингибированию пролиферации лимфоцитов, включая их важную роль в индукции апоптоза10. Хотя механизмы, вызывающие устойчивость лейкозных клеток к 6-тиогуанину, в настоящее время неправильно поняты11, было высказано предположение, что снижение или отсутствие активности гипоксантин-гуанинфосфорибозилтрансферазы (HGPT) вместе с измененной активностью тиопурин-S-метилтрансферазы (TPMT) стимулируют чувствительность и устойчивость к этому соединения12. Кроме того, было показано, что дефекты в системе репарации несоответствий ДНК стимулируют приобретенную устойчивость к многочисленным противораковым фармацевтическим соединениям, включая 6-тиогуанин13. Измерение уровней метаболита 6-ТГ в эритроцитах помогает определить адекватность дозировки AZA и может использоваться для оптимизации дозы антиметаболитной терапии для достижения улучшенного клинического ответа без индукции лейкопении14. Комбинация инфликсимаба и тиопуринов (например, 6-тиогуанина) у пациентов с воспалительными заболеваниями кишечника более эффективна, чем монотерапия. Измерение активности ТПМТ рекомендуется перед началом лечения пациентов тиопуриновыми препаратами, такими как 6-тиогуанин, что позволяет корректировать дозу тиопурина или полностью отказаться от препарата15. У представителей многих этнических групп полиморфизмы ТПМТ приводят к снижению (10% распространенности) или отсутствию (0,3%) активности ТПМТ16. Лица, гомозиготные или гетерозиготные по этим типам генетических вариаций, могут иметь повышенные уровни метаболитов TGN, что увеличивает риск лекарственной токсичности для костного мозга из-за накопления неметаболизированного препарата17. Уровни 6-TGN, превышающие 230 пмоль/8 × 108 эритроцитов, были связаны с улучшением результатов лечения у пациентов, получающих монотерапию. Уровень 6-тиогуанина 125 пмоль/8 × 108 эритроцитов или выше может быть достаточным для достижения терапевтического уровня инфликсимаба18. Как правило, уровни 6-TGN, превышающие 235 пмоль/8 × 108 эритроцитов, рекомендуются в качестве терапевтического порогового уровня для пациентов, принимающих AZA или 6-MP19. Безопасный и терапевтический уровень составляет от 500 до 800 пмоль/8 × 108 эритроцитов20. Для терапии 6-ТГ у пациентов с ВЗК точные терапевтические или токсические уровни 6-ТГН пока не описаны. Однако гепатотоксичность, особенно узловая регенеративная гиперплазия (NRH) и веноокклюзионная болезнь (VOD), зависит от дозы и связана с уровнями 6-TGN выше 1000 пмоль/8 × 108 эритроцитов21. Чрезмерное использование 6-ТГ во время клинического лечения может иметь экстратоксические побочные эффекты6. Кроме того, недостаточная дозировка будет неэффективной. Таким образом, быстрый и полностью проверенный подход к количественному определению 6-ТГ в жидкостях организма имеет решающее значение для клинического использования. В настоящее время иммуноанализы и высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) являются широко распространенными, практичными и чувствительными методами терапевтического мониторинга лекарственных средств22, 23.